油紅o染色液的染色步驟及其注意事項分析

　　油紅o染色液的染色步驟：
 

　　1、先小心輕緩倒去培養夜。
 

　　2、用pbs輕緩漂洗(不洗沒問題)。
 

　　3、加10%中性甲醛固定30min(實際固定時間過夜都沒問題。固定液用95%酒精也)。固定的是細胞膜。
 

　　4、稀釋油紅儲存液，油紅:去離子水=3:2,濾紙過濾，室溫放置10min(除去一些雜質，染色結果更清晰)
 

　　5、染色10min左右，加的體積覆蓋住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml(實際染色時間1小時都可以)。
 

　　6、脫色，用75%酒精/60%異丙醇漂洗，除去多余的染料(實際用其他平衡液洗也沒問題,背景并不會殘留多少)
 

　　7、復染，淡蘇木染色115分鐘，pbs漂洗(這一步不做也可，看試驗需要，并且蘇木素會把胞漿染紅，如要顯示核,hoechst33342也可以，濃度5微克/毫升染10分鐘即可把核染上)。
 

　　8、甘油明膠封片(封片后可長期保存)。
 

　　9、顯微鏡觀察。
 

　　油紅o染色液的染色注意事項：
 

　　(1)脂肪油紅染色,有的是動物/人體脂肪組織切片,或細胞爬片。
 

　　(2)成熟飽滿的脂肪細胞,容易破裂,脂滴泄漏,所以壓片,切片都要考慮到這個問題。
 

　　(3)細胞爬片細胞溶液脫落,特別是脂滴大的。操作務要輕柔。不要把細胞沖掉。
 

　　(4)如果做脂肪組織冰凍切片,冰凍溫度比普通要低,切片厚度加厚。