３分鐘學會電泳轉移緩沖液的使用方法

　　電泳轉移緩沖液是一種運用于分子生物學研究中電泳技術的重要試劑。電泳轉移緩沖液的功能是在電泳結束后將凝膠中分離的帶狀DNA、RNA、蛋白質等生物分子轉移到光滑的硬膜上，以便后續(xù)的檢測、識別、定量等工作。
 

　　電泳轉移緩沖液的使用方法，一般包括以下幾個環(huán)節(jié)：
 

　　1、準備光滑硬膜
 

　　在開始轉移之前，需要將需要轉移的生物分子的質量標準分離帶通過電泳移至凝膠中央，在這之后，需要準備一塊光滑的硬膜來接收分離的帶狀分子。硬膜的材質一般是聚氟乙烯、聚丙烯或硅膠等。
 

　　2、泡制電泳緩沖液
 

　　根據(jù)特定的樣品，需要選擇特殊的電泳緩沖液，可分為常用的轉移緩沖液和蛋白質轉移緩沖液兩種。常規(guī)轉移緩沖液的一般組成為甲酸(0.06M)和Tris-蛋白酸(0.025M)，pH值調(diào)節(jié)至8.3左右。蛋白質轉移緩沖液的組成也不同，其中包括引物、脯氨酸和甘氨酸等。在制備電泳緩沖液時，一般需要將其溶解于水中，并將pH值調(diào)整到的水平。
 

　　3、組裝電泳轉移單元
 

　　在電泳轉移之前，需要將制備的硬膜放置在電泳轉移單元的陽極側。在陽極側的上面，可以擺放吸水毛細管，在電泳緩沖液池的頂部也需要安裝帶濾紙的離子加工盒子。在開始時，先在離子加工盒子、水毛細管和硬膜之間放置吸水紙和濾紙，以防止在生物分子傳輸中產(chǎn)生空氣泡。
 

　　4、開始轉移
 

　　在準備好電泳轉移單元之后，需要將調(diào)節(jié)pH值的電泳緩沖液盛放于電泳池中。之后，將已切割的凝膠貼上硬膜，然后將其壓至硬膜表面。在準備好凝膠的條件之下，將準備好的凝膠一起懸掛于已裝載了溶液的鉑絡合物緩沖池中。隨著負極電流流過，生物分子帶將逐漸遷移到硬膜上。轉移時間一般根據(jù)具體的生物分子質量確定，通常設置在半小時至數(shù)小時之間。
 

　　5、染色和檢測
 

　　經(jīng)過電泳轉移和硬膜固定后，需要進一步處理并檢測生物分子的表現(xiàn)情況。染色一般使用銀染、Coomassie藍染色或卡羅林鈷染色等方法。之后，使用熒光探針、放射性探針或酶標記法等技術進行檢測。